CUT&Tag送样建议-J9九游会

声明：
实验室不接收《人间传染的病原微生物名录》（点击查看）的所有样品。对于高毒性动植物等样品，必须事先通过销售、客服或运营经理与J9九游会技术人员联系，确定无高致病性和传染性后才能寄送样品。
提取风险提示和注意事项：核酸提取质量与物种及组织部位、采集方法及保存状态、提取方法及操作、实验器材及环境等因素均有密不可分的联系，尤其是三代超长提取对样本的要求更高。组织提取时可能受到上下游处理操作的影响，因此较难保证单次提取满足质量要求，客户应在寄送组织样品前进行备份。为了保障获得高质量的核酸，请务必按照送样手册所规定的准备样本。对珍贵样本或者微量样本，建议自行提取。取样过程中，需要全程佩戴手套，并且使用预冷乙醇对取样器材进行擦拭消毒，以免样本污染

1. 细胞类样本

1.1 贴壁细胞

样本类型	送样量	样本保存和运输
冻存贴壁细胞	>40万/份，建议送备份冻存前活性>90% 复苏后活性>80%	冻存液冻存后将冻存管置于密封袋中，液氮保存，干冰运输。
新鲜贴壁细胞	>20万/份，建议送备份活性>80%	至少提前2天预约实验；推出短途、中途、长途不同运输方式，具体送样方案联系J9九游会销售。
冻存贴壁细胞处理方法：（1）取出贴壁细胞，显微镜下观察，确定生长状态是否良好，是否有细菌污染；（2）吸掉培养基，向细胞培养瓶/皿中加入适量1×PBS（体系中不可含Mg²⁺和Ca²⁺）洗2次；（3）弃尽PBS，加入适量胰酶放回37℃培养箱中消化，消化时间根据细胞类型进行调整，以显微镜下观察细胞是否分散作为调整标准；（4）加入5ml含血清的完全培养基终止消化，用吸管轻轻地吹下贴壁细胞，500g离心5min，小心去上清；（5）加入1×PBS（体系中不可含Mg²⁺和Ca²⁺）清洗一次，4℃ 500g离心5min，弃上清；（6）加入1ml配制好的冻存液（80%完全培养+10%FBS+10%DMSO）（百分比指体积比）重悬细胞沉淀，按照建议送样量分装，移至冻存管（请提前配置细胞冻存液且置于冰上预冷，防止新配置的冻存液过热损伤细胞，待冻存液恢复室温后使用）；（7）将冻存管置于程序降温冻存盒，于-80℃冰箱梯度降温并暂时保存（请严格按照程序降温来操作，对细胞造成的损伤最小）。24h后，请将程序降温盒中的细胞样本转移至液氮中保存。若没有程序降温冻存盒，建议使用人工传统降温方法：冻存管置于4℃ 10min→-20℃ 30min→-80℃ 16-18h（或过夜，最长放置不超过一个月）→转移至液氮长期储存。
新鲜贴壁细胞处理方法：（1）确定生长状态良好且无污染；（2）吸掉培养基，加入适量 1×PBS（体系中不可含 Mg2+和 Ca2+）洗 2 次，吸尽培养基；（3）小心吸除 PBS，加入适量胰酶，37℃培养箱中消化，消化时间和方式请根据细胞类型进行调整，以显微镜下观察细胞是否分散作为调整标准；（4）加入 5 mL 含血清的完全培养基终止消化，用吸管轻轻地吹下贴壁细胞，500×g 离心 5 min，小心去上清；（5）加入 1×PBS（体系中不可含 Mg2+和 Ca2+）清洗一次，4℃ 500×g 离心 5 min，弃上清；（6）用 1 ml 以上的培养基/血清重悬细胞沉淀，转移至 2 ml 离心管中，用 parafilm 对离心管进行密封。

1.2 悬浮细胞

样本类型	送样量	样本保存和运输
冻存悬浮细胞	>40万/份，建议送备份冻存前活性>90% 复苏后活性>80%	冻存液冻存后将冻存管置于密封袋中，液氮保存，干冰运输。
新鲜悬浮细胞	>20万/份，建议送备份活性>80%	至少提前2天预约实验；推出短途、中途、长途不同运输方式，具体送样方案联系J9九游会销售。
冻存悬浮细胞处理方法：（1）取出悬浮细胞于显微镜下观察，确定培养细胞生长状态是否良好，是否有细菌污染；（2）收集细胞，进行细胞计数，4℃ 500×g离心5min，小心弃上清；（3）加入1ml 1×PBS（体系中不可含Mg²⁺和Ca²⁺）重悬细胞沉淀，清洗一次，4℃ 500×g离心5min，小心弃上清；（4）加入1ml配制好的冻存液（80%完全培养+10%FBS+10%DMSO）（百分比指体积比）重悬细胞沉淀，按照建议送样量分装，移至冻存管（请提前配置细胞冻存液且置于冰上预冷，防止新配置的冻存液过热损伤细胞，待冻存液恢复室温后使用）；（5）将冻存管置于程序降温冻存盒，于-80℃冰箱梯度降温并暂时保存。24h后，请将程序降温盒中的细胞样本转移至液氮中保存。若没有程序降温冻存盒，建议使用人工传统降温方法：冻存管置于4℃ 10min→-20℃ 30min→-80℃ 16-18h（或过夜，最长放置不超过一个月）→转移至液氮长期储存。
新鲜悬浮细胞处理方法：（1）确定细胞生长状态良好且无污染；（2）进行细胞计数，每样本取 20 W 个细胞以上，细胞悬液 4℃ 500×g 离心 5 min，小心去上清，离心条件可根据细胞类型进行调整；（3）加入 1 mL 1×PBS（体系中不可含 Mg2+和 Ca2+）重悬细胞沉淀，清洗一次，4℃ 500×g 离心5 min，小心弃上清；（4）用 1 ml 以上的培养基/血清重悬细胞沉淀，转移至 2 ml 离心管中，用 parafilm 对离心管进行密封。

2. 动物组织

样本类型	送样量	样本保存和运输
动物组织	常见组织类型40mg 心、肾、神经等组织类型50mg 其他特殊部位联系后台评估备份1-2份	置于密封袋中，液氮速冻，干冰运输。
动物组织处理方法：（1）取新鲜组织，立即剔除结缔和脂肪组织等杂质；（2）将组织转移至新离心管中，用预冷的PBS溶液漂洗至将组织表面的残留血液冲洗干净。（肌肉组织不易清洗，建议增加漂洗次数）；（3）将冲洗干净的组织样本取出并用无尘纸擦干水分，若组织体积较大，应在冰上将组织切成小块或薄片（每份约50mg），之后置于2ml旋盖冻存管内，准备标记样本名称；（4）迅速置于液氮中冷冻30-60min，然后转移至-80℃冰箱中保存。

3. 植物组织

样本类型	送样量	样本保存和运输
植物组织	幼嫩的组织叶片0.3g 种子、根等特殊组织部位0.5～1g 植物组织建议送一份备份	置于密封袋，液氮速冻，干冰运输。建议选取幼嫩的叶片，种子、根等。
植物组织处理方法：（1）从植物体上取下新鲜组织，后用清水将材料表面的灰尘或泥土冲洗干净，吸干；（2）如果组织体积较大，应在冰上将组织切成小块或薄片，然后放入2ml或更大体积的旋盖冻存管中，每份>300mg，准备标记样本名称；（3）立即浸入液氮中速冻30min，之后保存于-80℃冰箱。

4. 其他类型样本

样本类型	送样量
自建库	文库体积≥15μl；文库QPCR检测，摩尔浓度大于2nmol/L；文库AATI检测，合格文库的峰型特点是：无接头、峰型正常（200bp起峰，之后有规律性起伏，无小片段）。

5. 注意事项

（1）确保细胞样本无外源污染，CUT&Tag建库不对样本进行污染源检测。
（2）以下全程操作体系中，不可含Mg²⁺和Ca²⁺，会影响Tn5酶的效率。
（3）目前可选择的抗体种类及货号见抗体列表：J9九游会CUT&Tag项目抗体列表（点击查看）。所需抗体若为非列表内，需提供抗体名称、货号、物种等信息进行评估；非列表内的抗体需自行提供；非组蛋白抗体，需提供目的蛋白分子量大小（标签抗体需提供蛋白大小+标签抗体大小）。
（4）原代细胞、经流式分选等初始活性较低的细胞样本，需评估。
（5）结缔组织、脂肪组织、血液、皮肤、毛发等特殊组织部位，需评估。
（6）细菌、真菌类样本需评估。
（7）收集好的样品放到离心管或EP管（不建议将样品直接装入密封袋），干冰运输并录样为【RNA组织】。
（8）【勿】使用RNAlatter、TRIzol、酒精保存。
特别提醒：自行购买的抗体，寄送前务必与抗体公司确认邮寄方式，根据抗体保存条件确定录样组织类型。

6. 样本打包及寄送建议

6.1 样本的打包
（1）核酸样品建议使用质量好的1.5ml或2ml 低吸附EP管装载样品，并用封口膜封口。为了防止样品管破裂，或者污染和混乱，请不要使用诸如PCR管、0.5ml EP管、八联管、96孔板、深孔板等非标准管送样。非标准管不利于样品保存以及后续实验的进行。如有样品使用非标准管制备，还请在送样前自行转管处理。
（2）组织样本建议根据送样量使用合适规格带螺纹帽的EP管、冻存管或者离心管装载组织样品，并用封口膜封口。
（3）为防止样品管在运输过程中受到干冰挤压破裂，最好将样品管放到50ml离心管或其他支撑物中，并在支撑物里添加棉花或卫生纸缓冲。大量样品建议将EP管放置在冻存盒中，并在冻存盒外面包裹气泡垫。如使用锡箔纸、自封袋装载的样品，为防止运输中受挤压破损，建议将锡箔纸折叠整齐装在自封袋中，在样品包装外再用气泡垫包好并固定。
（4）对于血液样品，建议采用5-10ml 塑料抗凝采血管装载，为了防止运输过程中采血管因挤压而损坏，需要将每支采血管管身均用气泡垫包好，然后放置到塑料或纸质包装盒中。
（5）用乙醇沉淀的样品由于运输中会有少量乙醇挥发出，建议将样品管盖用封口膜缠绕4-5圈。
（6）为便于处理和保存，组织样品送样量请不要超过建议送样量的5倍（特殊的得率较低的样品除外）。
6.2 样本的名称标识
（1）所有的样品必须具有清晰的标记，并且简洁明了。
（2）使用锡箔纸包装的组织样品建议在锡箔纸内外均标记样品名称，并将锡箔纸放在自封袋中，自封袋外面再标记上样品名称，防止锡箔纸上样品名称模糊引起样品混乱。
（3）使用乙醇沉淀的核酸样品，由于挥发出的乙醇会使记号笔的标记模糊，建议用油性记号笔将样品名称写在标签纸上，然后用透明胶带将标签纸粘贴在样品管壁上，并缠绕2-3圈。
（4）样品名称建议使用“字母+数字”命名方式标注在管盖。其他信息如日期、浓度、物种等可标注在管壁。所有标注内容需与《样品信息单》保持一致。