MeRIP-seq送样建议-J9九游会

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RNA甲基化（MeRIP-seq）

1. 细胞类样本
2. 组织类样本
3. 其他类型样本
4. 注意事项
5. 打包及寄送建议
- 5.1 样本的打包
- 5.2 样本的名称标识

声明：
实验室不接收《人间传染的病原微生物名录》（点击查看）的所有样品。对于高毒性动植物等样品，必须事先通过销售、客服或运营经理与J9九游会技术人员联系，确定无高致病性和传染性后才能寄送样品。
提取风险提示和注意事项：核酸提取质量与物种及组织部位、采集方法及保存状态、提取方法及操作、实验器材及环境等因素均有密不可分的联系，尤其是三代超长提取对样本的要求更高。组织提取时可能受到上下游处理操作的影响，因此较难保证单次提取满足质量要求，客户应在寄送组织样品前进行备份。为了保障获得高质量的核酸，请务必按照送样手册所规定的准备样本。对珍贵样本或者微量样本，建议自行提取。取样过程中，需要全程佩戴手套，并且使用预冷乙醇对取样器材进行擦拭消毒，以免样本污染。

1.细胞类样本

样本类型	常量建库	微量建库（只人、鼠）	注意事项
新鲜培养细胞	≥5*10⁷	≥5*10⁶	建议样品备份1-2份以防部分样品降解或RNA得率低导致总量不足。
细胞样本处理及运输方法：（1）细胞样本避免污染，贴壁细胞需充分消化，悬浮细胞和贴壁细胞需要进行一定的前处理；（2）前处理步骤：用PBS缓冲液（RNase-free）快速洗一次，加入1mlTrizol，用枪头反复抽打细胞，直至看不见成团的细胞块，整个溶液呈清亮而不粘稠的状态，液氮速冻，-80℃保存，干冰运输。（3）送样前备注好物种、部位、保存时间。

2.组织类样本

样本类型	常量建库	微量建库（只人、鼠）	注意事项
新鲜动物组织	≥2g	≥300mg	组织类样本切记不可反复冻融，反复冻融样本不建议送样。
新鲜植物组织	≥5g	-	组织类样本切记不可反复冻融，反复冻融样本不建议送样。
组织样本处理及运输方法：（1）取相应部位组织，尽量将组织切成1cm²左右的组织块；（2）将组织块放入旋盖冻存管中密封好，迅速置于液氮中速冻，-80℃保存，干冰运输。（3）送样前备注好物种、部位、保存时间。（4）皮肤、骨、结缔组织、脂肪等特殊组织建议送备份。

3.其他类型样本

样本类型	常量建库	微量建库（只人、鼠）	注意事项
自行提取RNA	≥30μg（单次建库）	≥2μg（单次建库）	-
样本类型		送样量	注意事项
自行送IP产物	IP后产物，不需要公司去除rRNA，不需要公司打断片段	IP 产物/Input样本送样量：单次建库大于20 ng，浓度大于1 ng/μl，插入片段大小分布建议在250-300 bp。	建议客户在IP过程中自行去除rRNA，且 IP后产物插入片段建议分布在250-300bp，J9九游会接收样品后会检测样品的总量和纯度，以J9九游会检测结果为准。
	IP后产物，需要公司去除rRNA，不需要公司打断片段	IP 产物/Input样本送样量：单次建库大于50 ng，浓度大于1 ng/μl，插入片段大小分布建议在250-300 bp。
	IP后产物，需要公司去除rRNA，需要公司打断片段为250-300bp	IP 产物/Input样本送样量：单次建库大于50 ng，浓度大于1 ng/μl。
	IP后产物，不需要公司去除rRNA，需要公司打断片段为250-300bp	IP 产物/Input样本送样量：单次建库大于20 ng，浓度大于1 ng/μl。

4.注意事项

（1）微量MeRIP只能做人、小鼠两类物种；
（2）低起始量和常量MeRIP的建库方式不同：常量MeRIP基于富集的mRNA进行IP及建库，微量MeRIP针对 total RNA去核糖体建库，因此不建议放在一起进行分析；
（3）常量MeRIP提取按管数收费；
（4）送样前备注好物种、部位、保存时间；
（5）样本存放时间：-80℃保存不超过3个月；
（6）非常规/模式物种、部位、请联系后台评估。

5 样本打包及寄送建议

5.1 样本的打包
（1）核酸样品建议使用质量好的1.5ml或2ml 低吸附EP管装载样品，并用封口膜封口。为了防止样品管破裂，或者污染和混乱，请不要使用诸如PCR管、0.5ml EP管、八联管、96孔板、深孔板等非标准管送样。非标准管不利于样品保存以及后续实验的进行。如有样品使用非标准管制备，还请在送样前自行转管处理。
（2）组织样本建议根据送样量使用合适规格带螺纹帽的EP管、冻存管或者离心管装载组织样品，并用封口膜封口。
（3）为防止样品管在运输过程中受到干冰挤压破裂，最好将样品管放到50ml离心管或其他支撑物中，并在支撑物里添加棉花或卫生纸缓冲。大量样品建议将EP管放置在冻存盒中，并在冻存盒外面包裹气泡垫。如使用锡箔纸、自封袋装载的样品，为防止运输中受挤压破损，建议将锡箔纸折叠整齐装在自封袋中，在样品包装外再用气泡垫包好并固定。
（4）对于血液样品，建议采用5-10ml 塑料抗凝采血管装载，为了防止运输过程中采血管因挤压而损坏，需要将每支采血管管身均用气泡垫包好，然后放置到塑料或纸质包装盒中。
（5）用乙醇沉淀的样品由于运输中会有少量乙醇挥发出，建议将样品管盖用封口膜缠绕4-5圈。
（6）为便于处理和保存，组织样品送样量请不要超过建议送样量的5倍（特殊的得率较低的样品除外）。
5.2 样本的名称标识
（1）所有的样品必须具有清晰的标记，并且简洁明了。
（2）使用锡箔纸包装的组织样品建议在锡箔纸内外均标记样品名称，并将锡箔纸放在自封袋中，自封袋外面再标记上样品名称，防止锡箔纸上样品名称模糊引起样品混乱。
（3）使用乙醇沉淀的核酸样品，由于挥发出的乙醇会使记号笔的标记模糊，建议用油性记号笔将样品名称写在标签纸上，然后用透明胶带将标签纸粘贴在样品管壁上，并缠绕2-3圈。
（4）样品名称建议使用“字母+数字”命名方式标注在管盖。其他信息如日期、浓度、物种等可标注在管壁。所有标注内容需与《样品信息单》保持一致。